GB/T 33410-2016.
1范圍
GB/T 33410規(guī)定了生化試劑中蛋白酶K活性檢測方法。
GB/T 33410適用于分子生物學(xué)實驗中使用的蛋白酶K活性的測定。
規(guī)范性引用文件
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GB/T 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
3術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本文件。
3.1
蛋白酶K活性單位protease K activity unit
在55℃,pH 8.0時,1 min內(nèi)水解酪蛋白產(chǎn)生1 ug L-酪氨酸為一個酶活性單位。注:活性單位為U/mg.U/g或U/mL。
4原理
蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶,可催化含有較多的絲氨酸位點的α-酪蛋白水解。本方法中采用a酪蛋白為反應(yīng)底物,經(jīng)蛋白酶K催化水解為L-酪氨酸,在275 nm處測定吸光度值。再通過測量各個濃度的L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液在275 nm 處的吸光度值,并構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線得出線性回歸方程，以外標(biāo)法定量。計算蛋白酶K的酶活性。
5儀器設(shè)備及器具
5.1 恒溫水浴鍋:控溫精度士0.2 ℃.
5.2 pH計:精確至0.01 pH.
5.3 紫外-可見分光光度計:吸光度值精確至0.001.
5.4 1 cm石英比色皿。
5.5電子天平:感量0.000 1 g.

檢測流程步驟

溫馨提示：以上內(nèi)容僅供參考使用，更多檢測需求請咨詢客服。