GB/T 38740-2020.Laboratory animal-Method for examination of simian Marburg virus (MARV).
1范圍
GB/T 38740規(guī)定了猴馬爾堡病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)的操作方法。
GB/T 38740適用于猴馬爾堡病毒的檢測(cè)。
2規(guī)范性引用文件
下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其較新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。
GB/T 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
GB/T 18088出入境動(dòng)物檢疫采樣
GB 19489實(shí)驗(yàn)室生物安 全通用要求
3術(shù)語(yǔ)和定 義
下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。
3.1
馬爾堡病毒 Marburg virus
一種高致病性病毒,屬絲狀病毒科(Filoviridae),單股負(fù)鏈RNA病毒,基因組約19.1kb,為已知的較大的負(fù)鏈RNA病毒。
3.2
逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction; real-time RT-PCR
將mRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后再作為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系中加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一條特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸片段,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR特異性擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。
3.3
噪音 noise
熒光PCR儀在僅僅使用PCR管和水的狀態(tài)下的本底熒光強(qiáng)度。
3.4
Ct值 cycle threshold value
從基線到指數(shù)增長(zhǎng)的拐點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的PCR反應(yīng)循環(huán)次數(shù)。

檢測(cè)流程步驟

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