GB/T 38481-2020.Determination of ultralow-frequency mutations for microorganisms-Duplex sequencing.
1范圍
GB/T 38481規(guī)定了用雙重測序法測定微生物超低頻突變的方法。
GB/T 38481適用于微生物基因組或基因片段超低頻突變的測定。
2規(guī)范性引用文件
下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其較新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。
GB/T 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
3術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本文件。
3.1
超低頻突變 ultralow-frequency mutations
化學、物理或生物因素導致微生物DNA發(fā)生的頻率低于1X 10-的永久性改變。
3.2
條形碼標簽 barcode label
接在待測DNA片段兩側(cè)的核苷酸片段,用以標示同一擴增家族的DNA.協(xié)助進行突變位點的確認。
3.3
互補標簽家族 complementary tag family
所有含兩端互補條形碼標簽的DNA片段。
3.4
雙鏈同源序列 double-strand consensus sequences;DCSs
帶有相同條形碼標簽的雙鏈DNA序列,包含反向互補鏈。
4原理
在待測DNA片段兩端接上一段12 nt隨機且互補的雙鏈核苷酸條形碼標簽,然后對所有帶有條形碼標簽的序列進行雙重的高通量測序。利用12 nt隨機互補標簽，排除掉測序文庫制備過程中所引入的突變,進而準確檢測突變位點和突變率。
5試劑
除非另有規(guī)定,僅使用分析純試劑。
5.1 水。GB/T 6682,一級。

檢測流程步驟

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